RIPA裂解液（强）

RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer, Strong）是一种经典的强效细胞与组织快速裂解试剂，广泛应用于动物组织和哺乳动物细胞中可溶性总蛋白的提取。RIPA全称为Radio Immunoprecipitation Assay（放射免疫沉淀分析），其裂解产物可直接用于常规的PAGE、Western Blot、免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（Co-IP）以及ELISA等多种下游蛋白分析实验。

本品为即用型溶液，采用优化的复合去垢剂配方，裂解强度高于NP-40裂解液和RIPA裂解液（中），能更彻底地裂解细胞，有效溶解膜蛋白、核蛋白及难溶性蛋白复合物。

核心组分与技术原理

本品采用强效的四级裂解体系设计，各组分协同作用，实现高效、彻底的细胞裂解与蛋白提取：

• 离子型/非离子型去垢剂：配方包含1% Triton X-100、1%脱氧胆酸钠（sodium deoxycholate） 和0.1% SDS。Triton X-100与脱氧胆酸钠协同作用，有效瓦解细胞膜的脂双层结构；SDS作为一种强效离子型去垢剂，能够进一步破坏核膜，高效提取核蛋白。

• 缓冲盐体系：50 mM Tris（pH 7.4） 和150 mM NaCl为蛋白提供温和稳定的pH环境与适宜的离子强度，有助于维持蛋白的天然构象。

• 蛋白酶与磷酸酶抑制剂：配方中通常预混了sodium orthovanadate、sodium fluoride、EDTA、leupeptin等多种抑制剂。这些成分能有效抑制蛋白降解，并保护磷酸化位点，尤其适用于磷酸化蛋白等翻译后修饰蛋白的提取。部分产品需在使用前自行添加PMSF，使终浓度达到1 mM。

产品优势

• 裂解高效：复合去垢剂配方能快速破坏细胞膜及核膜，释放胞浆蛋白、膜蛋白和核蛋白。

• 抑制全面：预混多种蛋白酶与磷酸酶抑制剂，有效防止提取过程中蛋白降解与修饰丢失。

• 应用广泛：适用于从培养细胞（贴壁和悬浮）、动物组织到微生物等多种生物样本的蛋白提取。

• 兼容性强：裂解产物可直接用于SDS-PAGE、Western Blot、免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（Co-IP）以及ELISA等多种下游分析。

• 即用便捷：无需自行配制各组分，开瓶即用。

核心应用场景

本品广泛应用于蛋白功能研究中的各类实验：

• 蛋白质电泳与免疫印迹：为SDS-PAGE和Western Blot实验提供高质量的蛋白裂解物。

• 免疫沉淀与免疫共沉淀：用于抗原-抗体复合物的特异性富集及蛋白质间相互作用研究。

• 磷酸化蛋白检测：特别适用于胞浆磷酸化蛋白和细胞核转录因子的Western Blot检测。

• 蛋白定量：裂解产物适用于BCA法蛋白定量。

使用说明

1. 准备：将RIPA裂解液（强）从储存条件取出，置于冰上融化。使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂（如PMSF至终浓度1 mM）。

2. 裂解：

• 贴壁细胞：吸弃培养液，用预冷PBS洗涤一次。按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入，用枪头吹打使裂解液与细胞充分接触。冰上孵育5-20分钟，期间可剧烈震荡数次以充分裂解。

• 悬浮细胞：离心收集细胞，弃上清。按照50-100 μL细胞沉淀加入250-500 μL裂解液的比例加入。用手指轻弹以充分裂解细胞。冰上孵育10分钟，期间每隔5分钟在涡旋混合仪上振荡30秒。

• 组织样本：将组织剪成细小碎片。按照每20 mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入。用玻璃匀浆器冰上匀浆或液氮研磨，直至充分裂解。

3. 收集：裂解完成后，在4℃下离心（12,000-14,000 g，10-15分钟），收集上清液即为所需的总蛋白样品。

注意事项

• 低温操作：所有裂解步骤应在冰上或4℃环境下进行，以维持蛋白稳定性。

• 蛋白定量：由于裂解液中含有高浓度的去垢剂（如Triton X-100），不能使用常规的Bradford法测定蛋白浓度，应使用BCA法。

• 沉淀处理：裂解液中含有SDS，低温下可能析出沉淀。使用前请仔细观察，若有沉淀，可于37℃水浴加热溶解，恢复至室温后使用。

• 分装保存：为避免反复冻融影响产品性能，建议收到产品后分装冻存于-20℃。

• 仅限科研使用：本品仅供实验室研究与分析测试使用，不得用于临床诊断或治疗。为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

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