蛋白酶K（Proteinase K）

蛋白酶K（Proteinase K）是一种源自林伯氏白色念珠菌（Tritirachium album） 的高活性广谱丝氨酸蛋白酶。因其兼具强大的蛋白水解能力与卓越的稳定性，已成为分子生物学、细胞生物学及生物制药领域中不可或缺的核心工具酶。

产品来源与特性

蛋白酶K属于枯草杆菌蛋白酶家族，其活性中心由Asp39-His69-Ser224构成催化三联体。本品为高纯度产品，经严格纯化去除DNA酶（DNase）和RNA酶（RNase）活性，确保不会对核酸样品造成额外降解。

• 分子量：约28.9 – 29.3 kDa

• 比活性：≥30 U/mg蛋白

• 活性单位定义：在37℃、pH 7.5条件下，每分钟水解酪蛋白底物生成1 μmol酪氨酸所需的酶量，定义为一个单位（U）

• 纯度：经SDS-PAGE检测，纯度≥95%

• 不含DNase/RNase：经检测确认不含脱氧核糖核酸酶和核糖核酸酶活性

卓越的酶学性能

1. 广泛的底物特异性

蛋白酶K能够切割脂肪族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，可降解多种天然蛋白质，包括对其它蛋白酶具有抵抗性的蛋白。它能高效降解样本中的组蛋白和核蛋白，从而释放核酸。

2. 优异的环境耐受性

• pH稳定性：在pH 4.0 – 12.5的极宽范围内均具有活性，最佳活性pH范围为pH 7.5 – 8.0

• 温度稳定性：最佳反应温度为65℃，但在此温度下酶自身也会迅速降解，建议反应温度选择50 – 55℃

• 去垢剂耐受性：在0.1% – 0.5% SDS存在下仍可保持活性，1% SDS可提高其活性；对EDTA、Triton X-100、Tween 20等常用试剂耐受性良好

• 激活条件：Ca²⁺（1-5 mM） 对蛋白酶K的热稳定性至关重要

3. 可逆失活

蛋白酶K可被苯甲基磺酰氟（PMSF） 或二异丙基氟磷酸盐（DFIP） 有效抑制。也可通过65℃加热10-15分钟实现部分失活。

核心应用场景

本品广泛应用于分子生物学、细胞生物学及生物制药等领域：

一、核酸提取与纯化（最核心应用）

• 基因组DNA/RNA提取：在核酸分离过程中，蛋白酶K能够有效降解核酸酶（RNase和DNase）及其他污染蛋白质，保护核酸分子不被降解。同时降解与核酸结合的组蛋白，使DNA和RNA从样品中充分释放

• 去除蛋白杂质：广谱降解样本中的杂蛋白（如血清白蛋白、球蛋白、细胞骨架蛋白），降低核酸溶液浊度与蛋白残留，提升核酸纯度（A₂₆₀/A₂₈₀ = 1.8 – 2.0）

• 去除内毒素：用于清除与阳离子蛋白质（如溶菌酶和核糖核酸酶A）结合的内毒素

二、分子生物学研究

• DNA-蛋白质相互作用研究（足迹法） ：用于降解与DNA结合的蛋白质，暴露DNA-蛋白质相互作用位点

• 染色质可及性分析（DNase-seq） ：用于样品前处理中的蛋白质去除

• 基因编辑与克隆：用于制备脉冲电泳的染色体DNA；蛋白酶K消化后可提高PCR产物的克隆效率

• 体外转录和翻译系统的优化：去除体系中的蛋白质杂质

三、蛋白质分析与样品制备

• 蛋白质印迹（Western Blot） ：用于样品制备中的蛋白质降解

• 石蜡包埋组织切片的抗原修复：暴露用于抗体标记的抗原结合位点

• 质谱样品前处理：对复杂蛋白样品进行高效酶解，实现高灵敏度蛋白质组学分析

四、细胞生物学研究

• 细胞凋亡检测：用于样品前处理

• DNA损伤与修复研究：用于样品制备

• 膜蛋白定位研究：用于确定酶在细胞膜上的定位

五、病毒检测与诊断

• 病毒核酸检测：在病毒DNA/RNA检测前处理中去除蛋白质干扰

• DNA疫苗和肝素制备：去除蛋白质杂质

使用与储存建议

品质保障

本品依托成熟的标准化生产工艺与严格的质量控制体系：

• 高纯品质：经色谱纯化处理，纯度≥95%

• 无核酸酶污染：经检测确认不含DNase和RNase活性

• 批次稳定：每批次产品均经过严格质检，确保性能稳定一致

• 仅限科研使用：本品仅供实验室研究与分析测试使用，不得用于临床诊断或治疗

厂家联系微信号（同手机号）：19850855600

淘宝购买链接：蛋白酶K溶液 PK（20mg/ml）(1ml*3) Proteinase K 科研试剂 提取

淘宝购买时联系客服备注：“富沃克官网”，有内部优惠哦！

厂家联系微信号（同手机号）：19850855600

或扫二维码添加微信：