一、核心功能

6× DNA Loading Buffer是核酸电泳前的“必备搭档”，同时承担三项核心功能：

增加密度：甘油（或Ficoll、蔗糖）使样品沉入点样孔底部，防止飘出。
指示电泳进度：溴酚蓝、二甲苯青FF等示踪染料随DNA一起迁移，可肉眼监控电泳进程。
保护DNA：EDTA螯合二价金属离子，抑制金属离子依赖性核酸酶对DNA的降解。

6×为6倍浓缩，使用时按1体积Buffer + 5体积样品混合，稀释至1×工作浓度。

二、自配操作要点（以经典甘油版为例，配制10 mL）

配方（基于Yeasen等主流供应商标准）

组分	用量	终浓度	说明
溴酚蓝	0.005 g	0.05%（w/v）	难溶解，需耐心搅拌
二甲苯青FF	0.005 g	0.05%（w/v）	难溶解，同上
0.5 M EDTA（pH 8.0）	0.6 mL	30 mM	母液需预先调pH至8.0
甘油	3.6 mL	36%（v/v）	室温下粘稠，取用需准确
去离子水	补足至10 mL	—	电阻率≥18.2 MΩ·cm

浓度调整提示：若希望显色更浅、条带背景更干净，可适当降低染料浓度（如减半至0.025%），不影响增稠和指示功能。

操作步骤

步骤	操作	关键要点
1	取一支15 mL离心管，加入约5 mL去离子水	—
2	称取0.005 g溴酚蓝和0.005 g二甲苯青FF	两种染料均难溶解，建议先加少量水搅拌成糊状再逐步稀释，否则极易结块
3	涡旋振荡或磁力搅拌至完全溶解	完全溶解标志：溶液呈深蓝色/蓝紫色，无可见颗粒；若仍有颗粒，可用0.22 μm滤膜过滤
4	加入0.6 mL 0.5 M EDTA母液（pH 8.0），混匀	EDTA母液必须预先调pH至8.0才能完全溶解
5	加入3.6 mL甘油，充分涡旋混匀	甘油粘稠，可用水稀释后加入；混合不匀会导致密度不均
6	加去离子水定容至10 mL，颠倒混匀10–15次	—
7	分装成小份（如500 μL/管），室温或4℃避光保存	如需长期保存（>12个月），可-20°C冻存

关键提醒

要点	说明
EDTA母液需预调pH	0.5 M EDTA在pH 8.0以下无法完全溶解，必须先调pH至8.0再使用
混合后无需再调pH	各组分溶解后直接定容即可（不含Tris-HCl的版本）
沉淀恢复	无SDS版：37°C水浴加热10分钟即可；含SDS版或严重沉淀：65°C加热10分钟
保存条件	室温运输；4°C可保存12个月，-20°C可长期保存

三、商业化即用型产品的价值

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称量、溶解、担心沉淀……如果不想在这些琐事上耗费时间，直接采购即用型产品是更高效的选择。

优质的商业化6× DNA Loading Buffer应满足：

标准配方精准（经质控验证）
批次间一致性高
无DNase/RNase污染
开瓶即用

官网链接：6X loading buffer-杭州富沃克生物科技有限公司

邮箱：support@fwkbio.com

厂家联系微信号：19850855600

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参考文献

[1] Yeasen Biotechnology. 6× DNA Loading Buffer. Product 10213ES. —— 用于经典甘油版配方（30 mM EDTA、36%甘油、0.05%溴酚蓝、0.05%二甲苯青FF）及染料迁移速率（TAE: 4,160 bp/370 bp；TBE: 3,030 bp/220 bp）。

[2] Sigma-Aldrich. Gel Loading Buffer 6X Tracking Dye. Product G2526. —— 用于含SDS版配方（0.05%溴酚蓝、40%蔗糖、0.1 M EDTA pH 8.0、0.5% SDS）及65°C加热恢复沉淀。

[3] Sigma-Aldrich. OmniPur® 6X Loading Buffer, 15% Ficoll. —— 用于Ficoll版配方。

[4] 6×DNA上样缓冲液配方. 百浩天生物. —— 用于EDTA母液预调pH至8.0及配制步骤参考。

[5] 6×Native-PAGE DNA上样缓冲液产品说明. 百奥莱博. —— 用于37°C加热恢复沉淀。