ACD-B抗凝液：血液保存的底层逻辑与使用决策
采血后还没来得及处理就凝固了，或者加了抗凝剂提取的基因组DNA得率却低得可怜——换了采血方式、调了离心参数、检查了所有试剂，最后发现是抗凝液本身没用对。
柠檬酸葡萄糖溶液B（ACD-B）是血液保存中最经典的抗凝体系之一。但它不是“万能通用”的——ACD有A和B两种处方，选错浓度、用错比例，抗凝效果和下游实验都会受影响。今天把抗凝原理、A/B处方差异、使用逻辑拆透——帮你一次选对、用对。
一、抗凝原理：钙离子是“开关”，柠檬酸根是“锁”
血液离开血管就会凝固，因为凝血级联反应依赖Ca²⁺作为“分子胶水”。ACD-B的抗凝逻辑不复杂——柠檬酸根与Ca²⁺形成可溶性络合物，把游离钙“锁”起来，凝血反应链就此中断。
ACD-B的三重功能：
| 功能模块 | 核心成分 | 作用 |
|---|---|---|
| 抗凝 | 柠檬酸钠 | 螯合Ca²⁺，阻断凝血级联 |
| pH缓冲 | 柠檬酸 | 维持微酸性（pH≈5.0），防止葡萄糖在高温灭菌时焦化 |
| 能量供给 | 葡萄糖 | 为红细胞代谢提供能量，延长保存时间 |
核心逻辑：柠檬酸根“锁住”钙离子阻止凝血，葡萄糖“养着”红细胞延长寿命——抗凝和保存同时完成。
二、选型决策：ACD-A vs ACD-B，用哪个？
ACD溶液分为A和B两种处方，核心区别在于浓度和用量，而非功能。
| 对比项 | ACD-A | ACD-B |
|---|---|---|
| 柠檬酸 | 8.0 g/L | 4.8 g/L |
| 柠檬酸钠 | 22.0 g/L | 13.2 g/L |
| 葡萄糖 | 24.5 g/L | 14.7 g/L |
| pH | 5.0 | 5.0 |
| 每100mL血用量 | 15 mL | 25 mL |
| 浓度 | 较高 | 约为A的一半 |
| 适用场景参考 | 血小板保存、常规采血 | 全血采集 |
怎么选？
| 实验需求 | 推荐选择 | 原因 |
|---|---|---|
| 常规血液保存 | ACD-A或B均可 | 两者保存期相同 |
| 全血DNA提取 | ACD-B | ACD提取高分子量DNA效果较好 |
| 血小板相关实验 | ACD-A | 参考推荐，具体以所用产品说明书为准 |
| 需减少稀释效应 | ACD-A | 用量少（15 vs 25 mL/100mL血） |
三、ACD-B标准配方
| 组分 | 浓度（w/v） | 配制1L用量 |
|---|---|---|
| 柠檬酸（C₆H₈O₇·H₂O） | 0.48% | 4.8 g |
| 柠檬酸钠（Na₃C₆H₅O₇·2H₂O） | 1.32% | 13.2 g |
| 葡萄糖（C₆H₁₂O₆·H₂O） | 1.47% | 14.7 g |
| 注射用水 | — | 定容至1L |
最终pH≈5.0。自行配制时推荐0.22μm过滤除菌；如需高压灭菌，建议在pH 4.5-5.5条件下115℃灭菌30分钟。
四、使用操作与保存
4.1 使用比例
不同来源的推荐比例略有差异，请以所用产品说明书的具体比例为准：
| 来源 | 混合比例 | 说明 |
|---|---|---|
| 碧云天ST496 | 6 mL血 + 1 mL ACD-B | 实验室科研使用 |
| 百度百科 | 100 mL血 + 25 mL ACD-B | 临床血液保存标准 |
| 部分商品化产品 | 20 mL血 + 3.5 mL ACD-B | 商业产品标准 |
4.2 操作流程
| 步骤 | 操作 | 关键要点 |
|---|---|---|
| ① | 将ACD-B溶液恢复至室温 | — |
| ② | 取适量ACD-B置于无菌离心管中 | 按说明书比例计算用量 |
| ③ | 采集新鲜血液，加入ACD-B中 | — |
| ④ | 立即轻轻颠倒混匀5-8次 | 避免剧烈振荡（防止溶血） |
| ⑤ | 2-6℃保存 | 可保存21天 |
4.3 保存条件
| 控制点 | 要求 | 说明 |
|---|---|---|
| 商品化产品 | 4℃密封保存 | 有效期6-12个月（以产品标签为准） |
| 自配溶液 | 4℃保存 | 建议3个月内使用 |
| 已开封 | 4℃保存，尽快使用 | 避免反复开启污染 |
| 分装建议 | 小量分装使用 | 减少污染风险 |
4.4 对下游DNA提取的影响
使用ACD作为抗凝剂提取全血DNA效果较好，提取高分子量DNA优于EDTA。但需注意：抗凝剂不能使用肝素（肝素是PCR的抑制剂）。
五、常见问题速查
| 问题 | 原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 加完抗凝剂血液还是凝固了 | ①比例不对 ②混匀不及时或不充分 | ①确认ACD-B与血液的比例 ②采血后立即轻轻颠倒混匀 |
| DNA提取得率低 | ①抗凝剂比例不当 ②血液保存时间过长 | ①按正确比例操作 ②尽量使用新鲜抗凝血 |
| 红细胞溶血 | 混匀时剧烈振荡 | 轻轻颠倒混匀，避免剧烈振荡 |
| ACD-B溶液变色或浑浊 | ①微生物污染 ②葡萄糖焦化 | 废弃，更换新溶液 |
| ACD-A和ACD-B搞混 | 两者浓度不同 | 确认产品标签，按对应比例使用 |
六、商业化即用型产品
邮箱：support@fwkbio.com
厂家联系微信号：19850855600
官网链接：柠檬酸葡萄糖溶液B 强效抗凝缓冲液 无菌 科研试验用 富沃克生物-杭州富沃克生物科技有限公司
参考文献
[1] ACD保存液[EB/OL]. 百度百科. —— 用于ACD-A与ACD-B配方差异：A每升含枸橼酸8.0g、枸橼酸钠22g、葡萄糖24.5g，B处方每升含枸橼酸4.8g、枸橼酸钠13.2g、葡萄糖14.7g，pH均为5.0，4℃保存21天。
[2] 碧云天生物技术. 柠檬酸葡萄糖溶液B（ACD，无菌）（ST496）产品说明[EB/OL]. —— 用于ACD-B配方组成（0.48%柠檬酸、1.32%柠檬酸钠、1.47%葡萄糖）、抗凝原理（柠檬酸钠螯合钙离子）及使用比例（每6mL新鲜血液加1mL）。
[3] 杭州富沃克生物科技有限公司. 柠檬酸葡萄糖溶液B 强效抗凝缓冲液产品说明[EB/OL]. —— 用于ACD-B产品特性（0.48%柠檬酸、1.32%柠檬酸钠、1.47%葡萄糖、0.22μm过滤除菌）及使用比例（每6mL新鲜血液加1mL）。
[4] ACD抗凝剂(B)产品说明[EB/OL]. biomart.cn/江苏艾迪生生物. —— 用于ACD-B保存条件（4℃、6个月）、使用比例（3.5mL ACD-B + 20mL血）及2-6℃保存21天。
[5] ACD抗凝粉剂(B)产品说明[EB/OL]. biomart.cn. —— 用于ACD-B配制后可于4℃保存3个月、分装保存避免污染。
[6] ACD抗凝剂（B，无菌）产品说明[EB/OL]. bestbio.com.cn. —— 用于无菌溶液组成（柠檬酸钠、柠檬酸、葡萄糖）及有效期6个月。
[7] ACD抗凝剂（B，无菌）产品说明[EB/OL]. biomart.cn. —— 用于使用比例3.5mL ACD-B + 20mL血。
[8] ACD抗凝剂配制方法[EB/OL]. 百度文库. —— 用于ACD作为抗凝剂提取全血DNA效果较好、优于EDTA、肝素禁用（PCR抑制剂）。
[9] ACD抗凝剂（B）产品说明[EB/OL]. 迈基生物. —— 用于使用比例3.5mL ACD（B）抗凝剂+10mL全血，0℃保存数天或-70℃长期保存。
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