琼脂糖凝胶(Agarose Gel)配制方案
产品信息
| 属性 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 琼脂糖凝胶(Agarose Gel) |
| 缓冲体系 | 0.5×TBE 或 1×TAE |
| 凝胶厚度 | 3~5 mm |
| 凝固条件 | 室温,约30~60 min |
| 保存条件 | 4 ℃保鲜膜密封(2~5天) |
缓冲液选择表
| 缓冲液 | 推荐用途 |
|---|---|
| 1×TAE | 常规琼脂糖凝胶电泳、DNA片段回收(推荐) |
| 0.5×TBE | 小片段DNA电泳(<1 kb)、高分辨率需求 |
凝胶浓度与DNA分辨范围速查表
| 琼脂糖浓度 | 最佳线形DNA分辨范围(bp) |
|---|---|
| 0.5% | 1,000 ~ 30,000 |
| 0.7% | 800 ~ 12,000 |
| 1.0% | 500 ~ 10,000 |
| 1.2% | 400 ~ 7,000 |
| 1.5% | 200 ~ 3,000 |
| 2.0% | 50 ~ 2,000 |
规格参数
| 参数 | 说明 |
|---|---|
| 凝胶浓度 | 0.5%~2.0%(根据目标片段选择) |
| 缓冲液 | 制胶与电泳须统一(TAE或TBE) |
| 凝胶厚度 | 3~5 mm |
| 染料 | 溴化乙锭(EB),终浓度0.5 μg/mL(可选) |
| 凝固时间 | 室温,约30分钟~1小时 |
配制步骤
1. 准备缓冲液
配制制胶与电泳用的缓冲液(0.5×TBE或1×TAE),两者必须一致。
2. 称量琼脂糖
根据所需凝胶体积和目标浓度称量琼脂糖粉,置于锥形瓶中(液体量不超过瓶容量50%)。
3. 加热熔化
封口膜封口并扎孔,微波炉加热至沸腾,摇匀后重复至完全熔化(溶液澄清透明)。
4. 冷却加染料
冷却至约60 ℃,可选加入溴化乙锭(终浓度0.5 μg/mL),混匀。
5. 倒胶插梳
倒入制胶模(厚度3~5 mm),垂直插入梳子。
6. 凝固使用
室温凝固30~60 min后,置于电泳槽中使用。
注意事项
缓冲液一致性:制胶用缓冲液与电泳槽运行缓冲液必须为同一缓冲体系(TAE或TBE),不可交叉混用。
琼脂糖必须完全熔化:未完全熔化的琼脂糖会导致电泳图像模糊、条带弥散。
防止暴沸:微波加热时间不宜过长,溶液起泡沸腾即停,摇匀后继续。
EB安全操作:溴化乙锭为致癌物,操作时必须佩戴手套,避免接触皮肤。
凝胶保存:不立即使用时,保鲜膜包好后4 ℃保存(2~5天)

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