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琼脂糖凝胶(Agarose Gel)配制方案
发布时间:2026-07-16 点击数:0

琼脂糖凝胶(Agarose Gel)配制方案

产品信息

属性内容
产品名称琼脂糖凝胶(Agarose Gel)
缓冲体系0.5×TBE 或 1×TAE
凝胶厚度3~5 mm
凝固条件室温,约30~60 min
保存条件4 ℃保鲜膜密封(2~5天)

缓冲液选择表

缓冲液推荐用途
1×TAE常规琼脂糖凝胶电泳、DNA片段回收(推荐)
0.5×TBE小片段DNA电泳(<1 kb)、高分辨率需求

凝胶浓度与DNA分辨范围速查表

琼脂糖浓度最佳线形DNA分辨范围(bp)
0.5%1,000 ~ 30,000
0.7%800 ~ 12,000
1.0%500 ~ 10,000
1.2%400 ~ 7,000
1.5%200 ~ 3,000
2.0%50 ~ 2,000

规格参数

参数说明
凝胶浓度0.5%~2.0%(根据目标片段选择)
缓冲液制胶与电泳须统一(TAE或TBE)
凝胶厚度3~5 mm
染料溴化乙锭(EB),终浓度0.5 μg/mL(可选)
凝固时间室温,约30分钟~1小时

配制步骤

1. 准备缓冲液
配制制胶与电泳用的缓冲液(0.5×TBE或1×TAE),两者必须一致。

2. 称量琼脂糖
根据所需凝胶体积和目标浓度称量琼脂糖粉,置于锥形瓶中(液体量不超过瓶容量50%)。

3. 加热熔化
封口膜封口并扎孔,微波炉加热至沸腾,摇匀后重复至完全熔化(溶液澄清透明)。

4. 冷却加染料
冷却至约60 ℃,可选加入溴化乙锭(终浓度0.5 μg/mL),混匀。

5. 倒胶插梳
倒入制胶模(厚度3~5 mm),垂直插入梳子。

6. 凝固使用
室温凝固30~60 min后,置于电泳槽中使用。

注意事项

  • 缓冲液一致性:制胶用缓冲液与电泳槽运行缓冲液必须为同一缓冲体系(TAE或TBE),不可交叉混用。

  • 琼脂糖必须完全熔化:未完全熔化的琼脂糖会导致电泳图像模糊、条带弥散。

  • 防止暴沸:微波加热时间不宜过长,溶液起泡沸腾即停,摇匀后继续。

  • EB安全操作:溴化乙锭为致癌物,操作时必须佩戴手套,避免接触皮肤。

  • 凝胶保存:不立即使用时,保鲜膜包好后4 ℃保存(2~5天)


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