10×TBE 缓冲液配制指南（1 L，pH 8.3）

概述

10×TBE缓冲液（Tris-硼酸-EDTA电泳缓冲液）是核酸电泳实验中两大经典缓冲体系之一，尤其适用于聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和小片段DNA/RNA的琼脂糖凝胶电泳。TBE的缓冲能力优于TAE，在高电压或长时间电泳条件下更能维持稳定的pH环境，因此在测序凝胶、变性凝胶等对pH稳定性要求较高的场景中具有不可替代的优势。本品为1 L规格10倍浓缩液，由Tris碱与硼酸反应生成Tris-硼酸缓冲对，EDTA螯合金属离子保护核酸完整性。使用时稀释10倍即得1×TBE工作液。本品直接采用Tris碱 + 硼酸 + Na₂-EDTA·2H₂O配制，三种组分按特定配比（108 g : 55 g : 7.44 g）混合后，pH自然稳定在8.3，无需额外使用酸碱调节。

所需材料

材料	规格	用量
Tris 碱	分析纯（≥99%）	108 g
硼酸（H₃BO₃）	分析纯	55 g
Na₂-EDTA·2H₂O	分析纯	7.44 g
去离子水	—	定容至1 L
pH计	精确校准（室温）	—

详细操作流程

第一步：称量与混合
称取108 g Tris 碱、55 g 硼酸、7.44 g Na₂-EDTA·2H₂O，置于1 L烧杯中，加入约800 mL去离子水。

第二步：搅拌溶解
充分搅拌至所有固体完全溶解。Tris碱与硼酸在搅拌过程中反应生成Tris-硼酸缓冲对，溶液呈无色透明状。若EDTA溶解缓慢（尤其在配制初期pH尚未稳定时），可滴加数滴1 M NaOH溶液助溶，NaOH的加入量极微，不影响最终配方。

第三步：pH检查与微调
本配方的Tris碱（108 g）与硼酸（55 g）是经典配比，按此比例配制的溶液pH应自然稳定在8.3，通常无需大幅调节。若pH偏离8.3，可用硼酸（pH偏高时）或Tris碱固体（pH偏低时）进行微量调节。

第四步：定容
将溶液转移至1 L容量瓶，用去离子水定容至1 L，盖塞后反复颠倒充分混匀。

第五步：保存
转移至试剂瓶中，室温密封保存。该缓冲液无需高压灭菌。

TAE vs TBE：如何选择？

比较项	TAE缓冲液	TBE缓冲液
缓冲体系	Tris-醋酸	Tris-硼酸
缓冲能力	较弱	更强（适合长时间/高电压电泳）
适合片段	大片段DNA（>1 kb）	小片段DNA/RNA（<1 kb）
PAGE适用性	不适用	首选（聚丙烯酰胺凝胶）
DNA回收效率	高（低盐利于回收）	较低（硼酸盐干扰回收效率）
酶活性影响	无显著影响	硼酸可能抑制部分酶活性（如连接酶、限制酶）
价格	较低	适中
工作液稳定性	1×不宜久置	1×可多次使用

选择建议：

琼脂糖凝胶电泳、大片段DNA、胶回收实验 → 推荐 TAE
PAGE电泳、小片段核酸分离（<500 bp）、测序凝胶、变性凝胶 → 推荐 TBE
酶切后电泳+胶回收 → 使用TAE（避免硼酸抑制后续酶反应）

稀释使用指南

10×TBE为浓缩储备液，使用时须稀释10倍：

需要1×TBE体积	10×TBE用量	去离子水用量
1 L	100 mL	900 mL
500 mL	50 mL	450 mL
200 mL	20 mL	180 mL
100 mL	10 mL	90 mL

📌 电泳使用注意：
琼脂糖凝胶电泳：通常使用0.5×TBE（而非1×）作为琼脂糖凝胶电泳的运行缓冲液，可获得更清晰的条带分辨率。
聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）：使用1×TBE作为凝胶配制缓冲液和电泳运行缓冲液。
TBE缓冲液可多次重复使用（缓冲能力强），但建议每使用3～5次后更换新鲜缓冲液。
电泳结束后，TBE缓冲液应按实验室废液规范处理。

常见问题与解决方案

问题	原因	解决方法
EDTA难以溶解，溶液浑浊	EDTA在中性或酸性条件下溶解度低	滴加少量NaOH溶液助溶，待溶液pH升至碱性后EDTA可完全溶解
长期保存后出现白色结晶/沉淀	硼酸在低温或高浓度下析出	37 ℃水浴加热并搅拌，沉淀完全复溶后即可正常使用
pH与8.3偏差较大	试剂纯度不足或称量误差	用硼酸或Tris碱微调，或核查原料纯度并重新配制
电泳时条带拖尾或弥散	缓冲液使用次数过多，离子强度变化	更换新鲜稀释的1×TBE工作液
RNA电泳出现降解	未使用DEPC处理水或无RNase条件	RNA电泳须使用DEPC处理水配制工作液，器具经DEPC处理

关键操作要点

经典配比自然pH 8.3：Tris碱（108 g）与硼酸（55 g）的配比决定了缓冲体系的pH，这一经典组合在定容至1 L后，溶液pH应自然稳定在8.3。若配制时pH偏差较大，应首先核查试剂纯度与称量准确性。
EDTA助溶技巧：Na₂-EDTA·2H₂O在pH＜8时溶解缓慢。若搅拌30分钟仍未完全溶解，可滴加微量NaOH溶液（约1～2 mL 1M NaOH）促进溶解，待溶液澄清后再定容。
无需高压灭菌：TBE为电泳用缓冲液，成分中不含可被微生物利用的营养物质，使用去离子水配制、洁净容器盛装即可，无需高压灭菌。
沉淀复溶不影响质量：长期储存后出现的白色沉淀为硼酸析出（非变质），37 ℃加热复溶后溶液性能完全恢复，可正常稀释使用。
琼脂糖电泳推荐0.5×TBE：与TAE不同，TBE在琼脂糖凝胶电泳中通常使用0.5×TBE工作液（即10×TBE稀释20倍），比1×TBE背景更低、条带更清晰。

应用场景

应用	说明
聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）	TBE是PAGE的首选缓冲体系，用于小片段DNA/RNA的高分辨率分离
琼脂糖凝胶电泳（小片段）	适用于<1 kb的DNA片段分析，推荐使用0.5×TBE工作液
变性凝胶电泳	用于RNA或单链DNA的变性电泳分析
DNA测序凝胶电泳	经典测序凝胶体系的缓冲液
SSR/AFLP分子标记检测	聚丙烯酰胺凝胶检测小片段差异