Ampicillin 溶液配制指南（100 mg/mL，50 mL）

概述

Ampicillin（氨苄青霉素）是最常用的β-内酰胺类抗生素之一，作为质粒筛选标记广泛用于含氨苄抗性基因（如pBR322、pUC系列载体）的转化子筛选。Ampicillin通过抑制细菌细胞壁合成过程中的青霉素结合蛋白（PBPs），干扰肽聚糖交联，导致细菌裂解死亡。

Ampicillin的作用机制：

💡 Ampicillin特点：β-内酰胺环对β-内酰胺酶敏感。使用Amp抗性菌株时，必须确保培养基中Ampicillin浓度足够，且筛选时间不宜过长（β-内酰胺酶会降解Ampicillin，导致“卫星菌落”出现）。

本品为50 mL规格的100 mg/mL储备液，配制后分装-20 ℃避光保存。配制全过程须在超净台内无菌操作。

要点	说明
操作环境	超净台内操作，使用校准分析天平称量，防止微生物污染
器具/溶剂无菌	所用离心管、量具、水须无菌（灭菌水或超纯水）
避免剧烈震荡	Ampicillin为β-内酰胺类抗生素，剧烈震荡可能导致β-内酰胺环破坏，降低活性
过滤除菌	必须使用0.22 μm滤器过滤除菌，严禁高压灭菌（高温破坏β-内酰胺环）
分装保存	1 mL/份分装，-20 ℃避光保存，避免反复冻融
防护要求	佩戴手套和口罩，避免吸入粉尘和皮肤接触

第一步：称量
在超净台内，使用校准分析天平称取5 g Ampicillin，转移至50 mL无菌离心管中。

第二步：溶解
加入约40 mL灭菌水，盖紧管盖，温和颠倒或低速涡旋至完全溶解（溶液应清澈透明，无色至淡黄色）。避免剧烈震荡（防止β-内酰胺环破坏）。

第三步：定容
用灭菌水定容至50 mL，轻轻颠倒混匀。

第四步：过滤除菌
使用0.22 μm滤器过滤除菌（严禁高压灭菌），收集滤液于无菌容器中。

第五步：分装与保存
小份分装为1 mL/份于无菌1.5 mL离心管中，标注“100 mg/mL Amp，-20℃”及配制日期，-20 ℃避光保存。

问题	原因	解决方法
Ampicillin溶解缓慢	加入水量少或水温低	室温下温和搅拌至溶解；不可加热
过滤速度极慢	Ampicillin浓度高，溶液粘稠	使用大直径滤器，分次过滤
误将溶液高压灭菌	操作疏忽	废弃重配（高温已破坏β-内酰胺环）
筛选平板出现“卫星菌落”	Ampicillin降解或β-内酰胺酶分泌	增加Ampicillin浓度至100 μg/mL；筛选时间不超过16小时
保存后出现沉淀或浑浊	降解或微生物污染	废弃重配；检查保存条件（-20℃，避光）
转化子筛选效率低	Ampicillin浓度过高（>100 μg/mL）或储存过久失效	使用100 μg/mL标准浓度；使用新鲜分装的储备液

⚠️ 严禁高温高压灭菌是核心原则：Ampicillin为热敏感抗生素，必须使用0.22 μm滤器过滤除菌，任何情况下不可高压灭菌。
超净台无菌操作：配制全过程应在超净台内进行，使用灭菌水和无菌器具，防止微生物污染。
避免反复冻融：Ampicillin在反复冻融中降解加速，1 mL/份小份分装、取用即弃是延长保质期的核心策略。每管标注配制日期，-20 ℃保存，有效期约6～12个月。
避免剧烈震荡：溶解时温和操作，剧烈震荡可能导致β-内酰胺环结构破坏，降低抗生素活性。
培养基添加温度：Ampicillin应于LB培养基灭菌后冷却至50～55 ℃时加入，避免高温破坏抗生素。加入后充分混匀再倒平板。
筛选时间不宜过长：Ampicillin在37 ℃培养条件下会逐渐降解，筛选时间建议不超过16小时（过夜培养即可）。
含Ampicillin的平板保存期限：含Ampicillin的LB平板在4 ℃避光保存，有效期约2～4周（建议不超过1个月）。

步骤	操作
①	LB培养基高温高压灭菌后，冷却至50～55 ℃
②	按1 mL/L（终浓度100 μg/mL）加入100 mg/mL Ampicillin储备液
③	充分混匀后倒制平板或液体接种
④	含Ampicillin的平板4 ℃避光保存，有效期约2～4周