IPTG 溶液配制指南（24 mg/mL，50 mL）

概述

IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside）是一种常用的lac启动子诱导剂，作为乳糖的结构类似物，可与lac阻遏蛋白结合，诱导β-半乳糖苷酶及下游基因的表达。在蓝白斑筛选中，IPTG与X-gal配合使用：IPTG诱导lacZα基因表达产生β-半乳糖苷酶α-肽段，该酶将X-gal底物水解为蓝色产物，使含重组质粒的白色菌落与未重组蓝色菌落区分开来。

IPTG vs 乳糖：

• IPTG：不被细菌代谢分解，稳定持续诱导，适用于实验室筛选

• 乳糖：可被细菌代谢利用，诱导效果不稳定，不适于筛选实验

本品为50 mL规格的24 mg/mL（100 mM）储备液，配制后分装-20℃避光保存。IPTG对热敏感，不可高压灭菌，须0.22 μm过滤除菌。

IPTG在蓝白斑筛选中的作用机制

所需材料

详细操作流程

第一步：称量
在超净台内，称取1.2 g IPTG，转移至50 mL无菌离心管中。IPTG为白色结晶粉末，称量时操作轻缓，避免扬尘。

第二步：溶解
加入约40 mL灭菌水，盖紧管盖，温和颠倒或低速涡旋至完全溶解（IPTG易溶于水，溶液应清澈透明）。

第三步：定容
用灭菌水定容至50 mL，轻轻颠倒混匀。

第四步：过滤除菌
过滤前核查0.22 μm滤器完整性（检查包装密封性、有效期），使用0.22 μm滤器过滤除菌（严禁高压灭菌），收集滤液于无菌容器中。

第五步：分装与保存
小份分装为1 mL/份于无菌离心管中（推荐使用棕色管或铝箔包裹避光），标注“24 mg/mL IPTG，-20℃”及配制日期，-20 ℃避光密封保存。

常见问题与解决方案

蓝白斑筛选操作要点

在LB平板中的使用（以100 mL培养基为例）

添加时机：

LB培养基高温高压灭菌后，冷却至50～55 ℃，依次加入IPTG和X-gal，充分混匀后倒平板。

保存期限：

含IPTG/X-gal的LB平板在4 ℃避光保存，有效期约2～4周（X-gal光敏感，随时间显色能力下降）。

IPTG稳定性的影响因素与防护

关键操作要点

1. ⚠️ 严禁高压灭菌是核心原则：IPTG为热敏感诱导剂，必须使用0.22 μm滤器过滤除菌，任何情况下不可高压灭菌。

2. 过滤前核查滤器完整性：使用前检查0.22 μm滤器包装是否完好、是否在有效期内，确保过滤除菌效果。

3. 超净台无菌操作：配制全过程在超净台内进行，使用灭菌水和无菌器具，防止微生物污染。

4. 分装避光保存是核心策略：IPTG对光敏感且反复冻融会导致活性下降，1 mL/份小份分装、-20 ℃避光密封保存、取用即弃是延长保质期的核心策略。

5. 标注完整信息：每管标注“24 mg/mL IPTG，-20℃”及配制日期，便于管理和跟踪有效期。

6. 避免反复冻融：取出一管IPTG后应一次性用完，剩余部分不可再冻存（已暴露于空气和光照）。

应用场景