一、核心参数一览
| 参数 | 内容 |
|---|---|
| 缓冲液名称 | TE缓冲液（Tris-EDTA buffer） |
| 标准命名 | T10E1（10 mM Tris + 1 mM EDTA） |
| 工作浓度 | 1×TE（标准储存液）；0.1×TE（某些实验场景） |
| pH值 | 8.0（室温下） |
| 保存温度 | 4°C（短期）；-20°C（长期）；-80°C（超长期） |
| 灭菌方式 | 121°C高压灭菌20分钟（灭菌后冷却至室温，pH恢复至8.0） |
二、DNA在纯水里为什么“待不住”？
纯DNA在水溶液中面临三个主要威胁：
| 威胁 | 机制 | 后果 |
|---|---|---|
| 核酸酶（DNase） | 环境中无处不在的DNase直接切割DNA骨架 | DNA降解为小片段 |
| 二价金属离子（尤其是Mg²⁺） | Mg²⁺是DNase的必需辅因子，同时也是DNA水解反应的催化剂 | 激活DNase + 加速化学降解 |
| pH波动 | 酸性或碱性条件均可导致DNA脱嘌呤/脱氨反应 | DNA链断裂、碱基修饰 |
这三种威胁中，Mg²⁺是最关键的“枢纽” ——它既是酶的“开关”，又能直接参与DNA的化学降解。因此，有效的DNA储存液必须同时解决这三个问题。
三、TE缓冲液的工作原理——两个组分，各司其职
TE缓冲液（Tris-EDTA buffer）是分子生物学中最经典的DNA储存液，标准配方为 10 mM Tris-HCl（pH 8.0）+ 1 mM EDTA。
两个核心组分的分工非常明确：
| 组分 | 浓度 | 核心功能 | 原理 |
|---|---|---|---|
| Tris-HCl | 10 mM，pH 8.0 | 维持弱碱性环境 | pH 8.0的弱碱性条件可有效抑制DNA的酸水解和脱嘌呤反应 |
| EDTA | 1 mM | 螯合二价金属离子 | EDTA通过四个羧基氧和两个氨基氮与Mg²⁺形成六齿螯合物（极其稳定的八面体结构），使依赖Mg²⁺的DNase失去活性 |
四、标准配制方法（以100 mL 1×TE，pH 8.0为例）
方法一：从母液稀释（最推荐，省时省力）
前提：实验室已有1 M Tris-HCl（pH 8.0）和0.5 M EDTA（pH 8.0）母液。
| 步骤 | 操作 | 关键要点 |
|---|---|---|
| ① | 量取 1 mL 1 M Tris-HCl（pH 8.0） | 提供终浓度10 mM Tris |
| ② | 量取 0.2 mL（200 μL）0.5 M EDTA（pH 8.0） | 提供终浓度1 mM EDTA |
| ③ | 将两种母液加入烧杯，加约80 mL灭菌ddH₂O，搅拌混匀 | 先在烧杯中混合再定容，比直接在容量瓶中操作更准确 |
| ④ | 转移至100 mL容量瓶，定容至刻度 | 确保终体积准确 |
| ⑤ | 颠倒混匀；如需灭菌，121°C高压灭菌20分钟 | 使用无菌母液和无菌水在无菌条件下操作，可免灭菌 |
方法二：从粉末配制（无母液时备用）
| 步骤 | 操作 | 关键要点 |
|---|---|---|
| ① | 称取 0.121 g Tris碱（分子量121.14 g/mol）和 0.0372 g EDTA·Na₂·2H₂O（分子量372.24 g/mol），置于烧杯中 | 检查试剂标签确认分子量 |
| ② | 加入约80 mL纯水，加热搅拌 | 加热可加速溶解，但关键前提是溶液需呈碱性——EDTA在酸性条件下几乎不溶 |
| ③ | 待大部分固体溶解后，冷却至室温 | 必须先冷却再调pH（Tris的pH随温度变化） |
| ④ | 滴加浓HCl调pH至8.0 | 务必在室温下调pH——温度每升高1°C，pH约下降0.03个单位 |
| ⑤ | 定容至100 mL，121°C高压灭菌20分钟 | — |
⚠️ 关键提醒：务必在室温下调pH
Tris溶液的pH值随温度变化——温度每升高1°C，pH约下降0.03个单位。这意味着：如果溶液在60°C时调至pH 8.0，冷却至室温后pH会升至约9.2。
因此必须在溶液冷却至室温后再调pH，否则实际使用时的pH会严重偏离预期（高达近1个单位），直接影响对DNA的保护效果。
五、保存条件
| 保存温度 | 预期保存时间 | 适用场景 |
|---|---|---|
| 4°C | 数周至数月 | 常规短期使用 |
| -20°C | 数月至2年 | 常规长期保存 |
| -80°C | 数年 | 珍贵样本超长期保存 |
使用前注意事项：
TE缓冲液在低温下可能析出少量沉淀，使用前检查溶液是否澄清。如有沉淀，室温水浴加热复溶并充分摇匀后即可使用
长期保存的DNA样本，建议分装后冻存，避免反复冻融造成的DNA剪切损伤
如DNA样品需用于对EDTA敏感的实验（如某些酶促反应），可改用低EDTA版本（如0.1 mM EDTA）或无EDTA缓冲液（如10 mM Tris-HCl，pH 8.0），但相应DNA保护效果会降低
六、常见问题速查
| 问题 | 原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 配好的TE缓冲液pH不对 | ①调pH时溶液未冷却至室温 ②pH计未校准 | 溶液完全冷却至室温后重新调pH；校准pH计 |
| 粉末法配制时EDTA不溶 | ①溶液呈酸性 ②未加热 | 确认Tris碱已完全溶解（提供碱性环境），加热搅拌；必要时用NaOH辅助调至pH 8.0 |
| 灭菌后pH变化 | 高压灭菌时Tris的pH随温度变化 | 灭菌后冷却至室温，pH会自然恢复至约8.0 |
| TE缓冲液中有白色沉淀 | 低温下EDTA或盐析出 | 室温放置或水浴加热复溶，充分摇匀后使用 |
| DNA在TE中保存后仍有降解 | ①核酸酶污染 ②反复冻融 | ①确保所有试剂和耗材无DNase污染 ②分装后冻存，避免反复冻融 |
七、商业化即用型产品
产品咨询：19850855600
邮箱：support@fwkbio.com
官网：杭州富沃克生物科技有限公司
产品链接：科研专用DNA储存液 长效稳定核酸保存液 实验室分子样本储存试剂-杭州富沃克生物科技有限公司
[1] TE Buffer. Wikipedia. —— 用于TE缓冲液定义（T10E1）、标准配方（10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0）及从母液配制方法（1 mL 1M Tris-HCl + 0.2 mL 0.5M EDTA定容至100 mL）。
[2] TE buffer protocol. Natural History Museum. —— 用于TE缓冲液保护DNA免受降解的原理（10 mM Tris, pH 8.0 with HCl, 1 mM EDTA）。
[3] TE缓冲液. 百度百科. —— 用于标准1×TE缓冲液组成（10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0）。
[4] TE Buffer (1×, pH 8.0). Cold Spring Harbor Protocols. —— 用于从母液配制100 mL TE缓冲液的方法（1 mL 1M Tris-HCl pH 8.0 + 0.2 mL 0.5M EDTA pH 8.0 + 约80 mL ddH₂O，再定容至100 mL）。
[5] 即用试剂灭菌说明. 广州美基生物. —— 用于高压灭菌条件（121°C, 20分钟）。
[6] TE缓冲液配制注意事项. —— 用于Tris溶液pH随温度变化（每升高1°C，pH降低约0.03个单位），需冷却至室温后调pH。
[7] TE Buffer storage recommendations. HiMedia Labs. —— 用于4°C短期保存、-20°C至-80°C长期保存。
[8] DNA sample storage best practices. QIAGEN. —— 用于-90°C至-65°C超低温保存建议。
[9] EDTA溶解方法. —— 用于EDTA在碱性条件下才易溶解的特性（EDTA·Na₂需调pH至8.0左右才能完全溶解）。
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