一、先搞懂“分子尺子”的刻度怎么来的
DNA Marker（DNA分子量标准物）本质是一组已知长度的DNA片段混合物。它的“刻度”——100 bp、250 bp、500 bp、1000 bp——对应每条带的准确片段长度。
常见的制备方式有三种：
| 制备方法 | 原理 | 特点 |
|---|---|---|
| PCR扩增法 | 设计多对引物扩增不同长度目标片段 | 目前主流方式，灵活定制，各条带浓度可独立优化 |
| 载体酶切法 | 用限制酶切割已知序列的质粒或λDNA | 传统方法，片段分布固定，浓度难以独立调控 |
| 化学合成法 | 人工合成特定序列片段 | 精准，适用于特殊需求 |
核心要点：所有条带的DNA浓度和片段大小都经过精确标定——这就是你用它做“尺子”的依据。
二、核心成分大起底
市面上的DNA Marker配方大同小异，核心成分就这几样（数据来源于多家品牌产品说明书）：
| 成分 | 它在干嘛 | 常见浓度 |
|---|---|---|
| Tris-HCl缓冲液 | 稳住pH（通常7.6~8.0） | 10 mM |
| EDTA | 螯合金属离子，抑制核酸酶 | 1~10 mM |
| 甘油 | 增加密度，让样品沉到点样孔底部 | 5%~10% |
| 示踪染料（溴酚蓝/二甲苯青/橙黄G） | 肉眼监控电泳进度 | 0.008%~0.05% |
三、怎么选——不同实验要配不同的“尺子”
不是随便拿一管Marker就能跑所有胶。选型前先问自己三个问题：
问题1：我的目标片段多大？
选型原则：应选择在目标片段大小附近条带较密的Marker，这样对目标片段大小的估计更准确。目标片段最好落在Marker条带的中间区域，而非两端。
问题2：我要跑琼脂糖凝胶还是PAGE胶？
琼脂糖凝胶：大多数常规Marker适用，片段范围100 bp–10 kb
PAGE胶：需选择低范围Marker（50–1000 bp）或专为PAGE设计的Marker，PAGE对小片段分辨率更高
问题3：需要精确定量还是只要看大小？
四、使用要点与参数速查
4.1 凝胶浓度怎么选？
| DNA片段大小 | 推荐琼脂糖凝胶浓度 | 推荐缓冲液 |
|---|---|---|
| >10 kb | 0.3%~0.7% | 1×TAE |
| 0.5–10 kb | 0.8%~1.0% | 1×TAE |
| <0.5 kb | 1.2%~1.5% | 1×TAE或0.5×TBE |
| 100–600 bp | 2.0%~2.5% | 0.5×TBE |
| 极小片段（如20 bp） | 5% | 0.5×TBE |
原则：大片段选择低浓度凝胶，用TAE缓冲液体系；小片段选择高浓度凝胶，用TBE缓冲体系。
4.2 上样量
| 参数 | 推荐值 | 说明 |
|---|---|---|
| 常规上样量 | 3–5 μL/孔 | 适用于大多数Marker |
| 宽胶孔（>5 mm） | 适当增加至5–10 μL | 根据胶孔宽度调整 |
| 窄胶孔（<3 mm） | 2–3 μL | 过多会导致条带相互挤压 |
| 通用原则 | 每1 mm胶孔宽度加1 μL | 最通用的计算方式 |
4.3 电泳条件
| 参数 | 推荐值 | 说明 |
|---|---|---|
| 电泳电压 | 4–10 V/cm（按凝胶长度计） | 跑太快条带歪斜，跑太慢浪费时间 |
| 电泳时间 | 以染料前沿跑到凝胶2/3~3/4处为准 | DL2000在5–7 cm凝胶中约15–20分钟 |
| 缓冲液 | 1×TAE或0.5×TBE | 及时更换新鲜缓冲液 |
4.4 操作要点
| 要点 | 说明 |
|---|---|
| 无需加热 | 直接化冻、混匀即可上样 |
| 使用前充分混匀 | 化冻后需彻底混匀 |
| 及时更换电泳缓冲液 | 老化的缓冲液离子浓度降低、pH上升，条带会模糊 |
| 使用高质量琼脂糖 | 琼脂糖纯度影响条带清晰度 |
| 分装保存 | 避免反复冻融 |
五、商业化即用型产品
产品咨询：19850855600
邮箱：support@fwkbio.com
官网链接：高清晰低拖尾 DNA Marker 即用型分子量标尺，条带锐利亮度均衡，适配 PCR 酶切核酸电泳科研实验耗材-杭州富沃克生物科技有限公司
参考文献
[1] Biomart. DNA 分子量标准Marker (100~5000 bp)产品介绍. 2025. —— 用于配方（10 mM Tris-HCl pH 7.6、10 mM EDTA、0.01%溴酚蓝、5%甘油）及上样量3–5 μL。
[2] 1 kb DNA Marker R产品说明. —— 用于配方（10 mM Tris-HCl pH 8.0、1 mM EDTA、0.033%溴酚蓝、0.008%二甲苯青、10%甘油）。
[3] 生工. DNA 分子量标准 Marker B（100~600 bp）产品说明. —— 用于配方（10 mM Tris-HCl pH 7.6、10 mM EDTA、0.033%溴酚蓝、0.008%二甲苯青、10%甘油）。
[4] ACE DL2000 DNA Marker产品说明. 2025. —— 用于DL2000条带组成（100、250、500、750、1000、2000 bp）、上样量3–5 μL及电泳条件。
[5] DL2000 DNA Marker产品说明. 北京特可美. —— 用于凝胶浓度1.0–2.0%、电压6–8 V/cm。
[6] novoprotein. DNA Marker的选购与问题解答. —— 用于凝胶浓度选择（<0.5 kb用1.2–1.5%、>10 kb用0.3–0.7%）、上样量（每1 mm加1 μL）、保存（4°C 3个月、-20°C 2年）及缓冲液更换。
[7] Yeasen. DNA Marker Selection Guide. —— 用于凝胶浓度与片段范围对应表（0.5%~3.0%）、保存条件（室温3–6个月、4°C或-20°C长期）。
[8] Yeasen. GoldBand DL5,000 DNA Marker产品说明. —— 用于保存条件（室温6个月、-20°C 2年）、避免反复冻融。
[9] 凯基. DNA Ladder DL5000产品说明. —— 用于上样量5 μL（或每1 mm加1 μL）、电压3–7 V/cm。
[10] Biomart. DNA Marker电泳常见问题分析. —— 用于条带模糊原因（降解、缓冲液陈旧、电压过高、上样量过多、凝胶质量）。
[11] 溴酚蓝-二甲苯青示踪染料迁移速率. 食品百科全书. —— 用于溴酚蓝约300 bp、二甲苯青FF约4 kb的迁移位置。
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