RIPA裂解液是蛋白提取实验中最常用的裂解体系之一,其名称源于放射免疫沉淀实验。根据去垢剂组成和裂解强度,RIPA裂解液分为强、中、弱三种型号。RIPA强裂解液因含有较高浓度的离子型去垢剂,裂解能力最强,适用于膜蛋白、核蛋白及难溶性蛋白的提取。其核心成分为50mM Tris(pH 7.4)、150mM NaCl、1% Triton X-100、1%脱氧胆酸钠和0.1% SDS,其中0.1% SDS和1%脱氧胆酸钠的协同作用能够有效破坏细胞膜和核膜结构。产品中添加了钒酸钠、氟化钠、EDTA、亮肽素等多种蛋白酶和磷酸酶抑制剂,可有效防止蛋白降解和磷酸酶活性改变。
选择RIPA裂解液型号时,需根据目标蛋白的定位和实验目的综合判断。核蛋白、膜蛋白或与细胞骨架紧密结合的难溶性蛋白,需选用强裂解液以确保提取效率。Co-IP实验需保持蛋白天然相互作用,而SDS和脱氧胆酸钠会破坏蛋白-蛋白间的非共价结合,因此强裂解液可能拆解蛋白复合物,干扰实验结果——此时可考虑使用中或弱裂解液,或选用交联剂稳定复合物后再裂解。对于常规细胞质蛋白提取,中、弱型裂解液通常已足够,可避免过度裂解带来的背景干扰和不必要的蛋白变性。
使用RIPA强裂解液需严格遵循低温操作原则,所有裂解步骤在冰上或4℃进行。PMSF需在临用前加入,不可预先混入裂解液中长期存放。贴壁细胞按6孔板每孔150-250μL、悬浮细胞按50-100万细胞/100μL的比例加入裂解液;组织样品按20mg组织加入150-250μL的比例处理,建议液氮冷冻研磨后匀浆。裂解后4℃、10000-14000g离心3-5分钟取上清。若裂解产物中出现透明胶状物,为基因组DNA-蛋白复合物,属正常现象——若目标蛋白不与DNA紧密结合,离心取上清即可;若需检测与基因组紧密结合的核蛋白,建议超声处理后离心取上清。蛋白浓度测定推荐使用BCA法,Bradford法会受去垢剂干扰导致结果偏高。
杭州富沃克生物科技有限公司提供RIPA强裂解液产品,采用经典配方,有效裂解细胞膜与核膜,提取膜蛋白与核蛋白效率高,适用于Western Blot、IP等蛋白分析实验场景。
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