LB 培养基配制指南（1 L，pH 7.0）

概述

LB培养基（Luria-Bertani Medium）是分子生物学中最常用的细菌培养基，由胰蛋白胨、酵母提取物和氯化钠组成，富含肽、氨基酸、碳水化合物、维生素和矿物质，为大肠杆菌等细菌提供充足的营养来源，支持快速生长和高密度培养。

各组分功能：

LB培养基是质粒扩增、感受态制备、蛋白表达等实验的基础。根据不同的实验需求，LB培养基有多种衍生配方（如LB-Miller、LB-Lennox、LB-Bertani），本方案为最通用的LB-Miller配方（1% NaCl）。

配方	Tryptone	Yeast Extract	NaCl	适用场景
LB-Miller（本方案）	10 g	5 g	10 g	最常用，通用LB配方
LB-Lennox	10 g	5 g	5 g	低盐需求实验
LB-Bertani	10 g	5 g	10 g	与Miller相同（不同命名）

💡 选择建议：常规大肠杆菌培养、质粒扩增、感受态制备推荐LB-Miller，盐浓度适中。

第一步：称量（注意防吸潮）
称取10 g Tryptone、5 g Yeast Extract、10 g NaCl，置于1 L烧杯中。

⚠️ Tryptone与Yeast Extract均为吸潮性粉末，称量后立即密封试剂瓶，防止吸潮结块影响后续称量和溶解。

第二步：加水溶解
加入约800 mL去离子水，使用磁力搅拌器充分搅拌至完全溶解（溶液应呈浅黄色浑浊状，无可见颗粒）。

第三步：pH调节
在搅拌条件下缓慢滴加5N NaOH（约0.2 mL），使用pH计监测，将pH精确调至7.0。

⚠️ 缓慢操作，避免NaOH过量导致pH骤升。灭菌后pH会轻微偏移（≤±0.1），为正常现象，不可二次调节。

第四步：定容
用去离子水定容至1 L，充分混匀。

第五步：灭菌
高温高压灭菌（121 ℃，15～20 min）。灭菌后培养基应为浅黄色透明液体。

⚠️ 冷却负压控制：灭菌后冷却过程中避免容器密封过紧（如瓶盖旋太紧），防止冷却后负压导致容器变形。

第六步：保存
4 ℃密封保存，有效期不超过7天。启用后需无菌操作，避免污染。

状态	外观	pH
灭菌前	浅黄色浑浊液体	7.0（调节后）
灭菌后	浅黄色透明液体	7.0 ± 0.1（轻微偏移）

💡 灭菌前浑浊是因为蛋白质和酵母提取物在室温下不完全溶解，灭菌后高温使营养物彻底溶解，培养基变为澄清透明。这是正常现象，非培养基质量问题。

问题	原因	解决方法
Tryptone/Yeast Extract结块	吸潮（未及时密封）	结块不影响使用，可研磨后称量；称量后立即密封
灭菌前培养基浑浊不溶解	Tryptone/酵母提取物未完全溶解	继续搅拌至完全溶解；可适当加热（<50 ℃）助溶
灭菌后培养基仍有沉淀或浑浊	水质硬度高或培养基质量差	使用超纯水；更换高质量Tryptone/Yeast Extract
灭菌后pH偏移超过±0.2	NaOH调节过量或水质影响	下次配制时微调NaOH用量，灭菌后不可二次调节
4℃保存后出现沉淀	盐分析出或蛋白质聚集	37 ℃水浴加热溶解后使用；检查是否超过7天有效期
接种后细菌生长缓慢	pH偏离（>7.5或<6.5）或培养基污染	检查pH；确保灭菌彻底且无菌操作
培养基颜色偏深（棕黄色）	灭菌温度过高或时间过长	使用121 ℃ 15～20 min标准条件，避免超时

称量后及时密封：Tryptone与Yeast Extract极易吸潮，称量后应立即密封试剂瓶，防止剩余粉末结块影响后续使用。
pH调节缓慢操作：NaOH为强碱，逐滴加入、充分搅拌后读数，避免过量。灭菌后pH会轻微下降（≤±0.1），不可二次调节（二次调节会引入污染并影响渗透压）。
灭菌后冷却注意负压：灭菌后冷却过程中瓶内压力下降，避免瓶盖旋得过紧，否则可能造成容器变形或难以开启。
有效期管理：4 ℃保存不超过7天。超过7天或出现浑浊、沉淀、异味，应废弃重配。建议每批配制后标注“配制日期”和“有效期”。
启用后无菌操作：每次取用使用无菌移液管或无菌吸头，避免反复开盖造成污染。
含抗生素培养基制备：若需制备含抗生素LB平板，应于灭菌后冷却至50～55 ℃时加入抗生素（Ampicillin 1 mL/L、Kanamycin 1 mL/L等），高温时加入抗生素会失效。